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2×qPCR mix图片
产品货号:
GS2280
中文名称:
2×qPCR mix
英文名称:
2×Green-Go qPCR Mastermix
产品规格:
4×1.25mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种非常方便的qPCR预混液,包括dNTPs、Hotstart Fast Taq polymerase、MgCl2、荧光染料、参考染料和独特的的缓冲组分。本制品具有灵敏度高、信噪比高和特异性强等特点。




货号名称适用仪器规格
GS22772×Green-Go qPCR Mix(ROX)ABI 7000,7300,7700,7900;
StepOnePlus StepOne;
Eppendorf Realplex 4
4×1.25mL
GS22782×Green-Go qPCR Mix(Low ROX)ABI7500;
StratageneMx3000,Mx3005,Mx4000
4×1.25mL
GS22792×Green-Go qPCR Mix(iCycler)BioRad iCycler,iQ5,MyiQ4×1.25mL
GS22802×Green-Go qPCR MixBioRad CFX96;
Roche LightCycler480;
MJResearch Opticon and Opticon 2;
MJ research Chromo4;
Corbett Rotor-grene600,3000;
EppendorfRealplex 2
4×1.25mL

保存:-20℃,避光,避免反复冻融,有效期2年。


反应混合液准备好后即开始PCR,PCR反应开始前始终将反应混合液放在冰盒中冷却。


  • 冰上溶解Green-Go qPCR Mix,模板DNA,引物和RNase-free水。彻底混匀各溶液组分。按下表配制反应体系:
    成分用量终浓度
    2×Green-Go Mastermix10μL
    Forward Primer(10μM)0.2~0.4μL100~200 nM
    Reverse Primer(10μM)0.2~0.4μL100~200 nM
    Template DNAVariable≤ 500ng/reaction
    RNase-Free ddH2O至20μL-
  • 根据下列循环程序运行qPCR:
    步骤温度时间循环数
    预变性95℃3min1
    变性95℃3sec 40
    退火/延伸/数据采集60℃20sec
    溶解曲线分析按照仪器要求进行设置



  • 无任何荧光信号
    可能原因意见和建议
    循环程序设置错误。检查仪器设置是否与实验相符。
    缺少组分(比如引物或模板)。检查反应混合液的组成。
    循环程序缺少必要步骤检查循环程序。
    反应管是空的,未加入相应试剂离心后检测PCR板中的每一个孔
  • 荧光信号增加较迟
    可能原因意见和建议
    循环程序设置错误。检查仪器设置是否与实验相符。
    起始模板不足。检查模板浓度的计算;如果有可能则提高模板浓度。
    退火温度过高。利用梯度优化退火温度;如果梯度特征不明显,则退火温度按每2℃为一个梯度进行递减。
    扩增片段长导致延伸时间不足。增加延伸时间。
    引物浓度过低。提高引物浓度(每个引物最高为900 nM)。
    PCR程序不合适。确保使用的是推荐的PCR程序。如有需要,以推荐的程序为出发点进行优化。
  • 荧光信号正常但效率低
    可能原因意见和建议
    吸量误差检查反应混合液的组成。
    前面反应形成的引物二聚体污染了体系。PCR循环开始前用UNG处理。
    引物设计不完善或模板浓度非常低。重新检查引物设计及模板浓度。
    样品中的抑制成分影响反应。重新纯化DNA。
    初始模板浓度低。提高模板量。
  • 标准曲线的C(t)和模板含量的对数值非线性相关。
    可能原因意见和建议
    模板稀释不准确。重新进行系列稀释并保证样品混合均匀。
    模板含量太高。减少模板含量;提高反应液体积。
    模板含量太低。提高模板含量。
    引物二聚体被共同扩增。重新设计引物。

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